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Las pipetas son un tipo de equipo de laboratorio que se utiliza para medir y transferir volúmenes muy pequeños de líquido. La precisión en la medición con pipetas es necesaria, ya que cualquier discrepancia en los volúmenes dispensados puede afectar los resultados de un experimento. Para garantizar la precisión, es necesario que verifiques la calibración de la pipeta cada pocos meses. El proceso de calibración ayuda a verificar si el equipo está distribuyendo o no los volúmenes adecuados para que puedas ajustar este detalle si no es el caso.
Pasos
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Reúne los materiales necesarios. Para verificar la calibración de una pipeta, vas a necesitar la propia pipeta, puntas de pipeta, agua destilada, un vaso de precipitados, un termómetro, una balanza y bandejas de pesaje. La balanza debe especificar los microgramos para calibrar micropipetas con un máximo de 1 microlitro. [1] X Fuente de investigación
- No vas a necesitar más de 5 ml de agua. Llena el vaso de precipitados con agua.
- Asegúrate de que las puntas de pipeta sean las correctas y encajen correctamente a la pipeta.
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Mide la temperatura del agua destilada. Coloca el termómetro en el agua y déjalo durante al menos un minuto. Si la línea roja del termómetro continúa moviéndose, debes dejarlo por otro minuto. Después de un minuto, registra la temperatura en un cuaderno. Retira el termómetro y sécalo cuando termines. [2] X Fuente de investigación
- Es importante que sepas la temperatura del agua para realizar los cálculos y verificar la calibración.
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Coloca la bandeja de pesaje sobre la balanza y ponla en cero. Lo ideal es que utilices una balanza con puertas que sea una cámara aislada. Coloca la bandeja de pesaje en la cámara y cierra las puertas. Si no tiene puertas, simplemente coloca la bandeja sobre la balanza. Presiona el botón “cero” o “tara” y espera hasta que la balanza indique cero. [3] X Fuente de investigación
- Al poner la balanza en cero, restas el peso de la bandeja de plástico, lo que te permite medir solo el peso de lo que has colocado en su interior.
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Prepara la pipeta para su calibración. Limpia la pipeta con etanol para eliminar cualquier contaminante antes de comenzar y asegúrate de que nada obstruya la punta de la pipeta. Coloca la punta adecuada en el extremo y configura el volumen que deseas probar. [4] X Fuente de investigación
- Para la calibración, debes probar tanto el volumen más pequeño como el más grande que la pipeta puede dispensar. [5] X Fuente de investigación
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Enjuaga previamente la punta antes de la calibración. Presiona el botón hasta la primera parada y sumerge la punta en el agua destilada hasta aproximadamente 2 mm. Suelta el botón para aspirar un poco de líquido y luego vuelve a dispensar el líquido presionando el botón hacia abajo. Repite este procedimiento tres veces para enjuagar previamente la punta. [6] X Fuente de investigación
- Presiona el botón hasta la segunda parada para dispensar cualquier líquido que quede en la punta y extrae la pipeta del agua.
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Aspira el volumen de calibración. Con la punta fuera del líquido, presiona el botón hacia abajo hasta la primera parada. Coloca aproximadamente 2 mm de la punta en el agua destilada y suelta el botón para aspirar el líquido en la punta. Debes esperar aproximadamente 1 segundo antes de extraer la punta del agua. [7] X Fuente de investigación
- Asegúrate de que la punta quede completamente sumergida durante todo el proceso de aspiración para evitar la formación de burbujas en la punta y conseguir resultados incorrectos.
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Dispensa el líquido en la bandeja de pesaje sobre la balanza. Coloca la punta contra el fondo de la bandeja de pesaje y presiona el botón hacia abajo hasta la primera parada. Muévete a otro punto un poco alejado del agua y presiona el botón hasta la segunda parada. Mantén presionado el botón mientras levantas la punta de la bandeja de pesaje. [8] X Fuente de investigación
- Mantén la punta sobre la pipeta, ya que la vas a utilizar de nuevo para pesar más pruebas de calibración. Asegúrate de que la punta no toque nada.
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Registra el peso en la balanza. Cierra la puerta si estás utilizando una balanza de cámara. Espera hasta que los números dejen de cambiar. Registra este número en un cuaderno. [9] X Fuente de investigación
- Es importante que esperes hasta que el número se haya estabilizado antes de registrarlo. Es probable que consigas lecturas incorrectas si no esperas.
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Repite este procedimiento para tomar al menos 10 lecturas. Pon en cero la balanza, enjuaga previamente la punta, aspira el mismo volumen, dispensa el volumen y luego registra el peso. El objetivo es contar con múltiples registros del mismo volumen y luego puedes promediarlos todos juntos. [10] X Fuente de investigación
- Puedes repetir este mismo procedimiento con diferentes volúmenes siempre que tomes varias lecturas por volumen.
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Define la fórmula para el volumen calculado. La fórmula para calcular el volumen dispensado por la pipeta es V = w * Z donde w es el peso del agua, Z es el factor de conversión que se basa en la densidad del agua y V es el volumen calculado de la cantidad de agua dispensada.
- Puedes calcular la variable Z al medir la densidad del agua utilizando la temperatura registrada al comienzo del experimento. [11] X Fuente de investigación
- Por ejemplo, si la temperatura del agua fue de 23 °C, entonces vas a utilizar un valor Z de 1,0035 microgramos.
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Promedia las réplicas juntas. Debes pesar el volumen de agua dispensada por la pipeta al menos 10 veces. Para promediar todos estos valores, debes sumarlos y dividirlos entre 10. Si has realizado más o menos ensayos, suma cada ensayo y divide entre el número total de ensayos.
- Por ejemplo, los diez pesos que registraste para un volumen de pipeta de 10 microlitros son los siguientes: 9,89, 10,01, 10,02, 9,99, 9,95, 10,04, 9,96, 10,01, 9,99 y 9,98.
- Entonces, el promedio es: (9,89 + 10,01 + 10,02 + 9,99 + 9,95 + 10,04 + 9,96 + 10,01 + 9,99 + 9,98)/10 = 99,84/10 = 9,984.
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Conecta las variables a la ecuación y resuelve. Una vez que hayas determinado los números adecuados a utilizar para cada variable, puedes conectarlos a la ecuación y resolver el volumen calculado. Para hacerlo, simplemente debes multiplicar el peso promedio de todas las pruebas por el valor Z.
- Por ejemplo: V = w * Z = 9,984 * 1,0035 = 10,019
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Calcula la precisión de la pipeta. Para calcular este detalle, puedes utilizar la ecuación A = 100 x V prom /V 0 , donde A es la precisión de la pipeta, V prom es el volumen promedio calculado y V 0 es el valor que configura la pipeta para dispensar. La precisión debe oscilar entre 99 y 101 %. [12] X Fuente de investigación
- Si la pipeta se encuentra bien calibrada, el valor calculado debe encontrarse muy cerca del valor real que configuraste en la pipeta.
- Por ejemplo: A = 100 x V prom /V 0 = 100 x 10,019/10 = 100 x 1,0019 = 100,19 %
- Esta pipeta en particular está correctamente calibrada.
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Envía la pipeta para que la calibren si es necesario. Si la pipeta no pasa la prueba de calibración, debes dejar de utilizarla para experimentos de inmediato. Las pipetas son piezas de equipo de laboratorio muy delicadas y costosas. No puedes arreglar la calibración por tu cuenta, por lo que tendrás que enviarla para que reciba un servicio adecuado. Otra alternativa es que alguna compañía acuda a tu laboratorio y calibre las pipetas en ese lugar. [13] X Fuente de investigación
- Ponte en contacto con la empresa que fabrica tu marca particular de pipetas para solicitar un servicio de mantenimiento.
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Referencias
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://www.pipettecalibration.net/pipette-calibration-files/guide-to-pipetting-2.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
- ↑ http://g6pd.qap.tw/Pipette%20calibration.pdf
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