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El ácido desoxirribonucleico, abreviado como ADN, codifica todos los rasgos que posee cualquier organismo, y determinadas combinaciones de nucleótidos de ADN crean diferentes genotipos o pares de rasgos. Las características representadas en un genotipo pueden ser dominantes o recesivas y definirán el modo en que el organismo expresa ese rasgo. Para determinar un genotipo, puedes emplear un cuadro de Punnett, pero si trabajas en un laboratorio más avanzado, puedes utilizar métodos analíticos como el análisis de PCR y la hibridación de ácidos nucleicos para así comprobar los genotipos que están presentes.
Pasos
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Dibuja una cuadrícula de 2 x 2. El cuadro de Punnett se emplea para determinar la probabilidad del genotipo de los hijos a partir de los genotipos de sus padres. Además, debe estar etiquetado con el genotipo de cada progenitor y, en su interior, se deben mostrar los posibles genotipos de los hijos. [1] X Fuente de investigación
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Etiqueta el lado izquierdo. Toma el genotipo de uno de los padres y divide las dos letras (que representan rasgos dominantes y recesivos). Coloca una letra a la izquierda de la fila superior y la otra, a la izquierda de la fila inferior. De este modo, se representará la contribución del padre al genotipo del hijo. [2] X Fuente de investigación
- Es habitual poner un rasgo dominante (letra mayúscula) en la fila superior y un rasgo recesivo (letra minúscula) en la parte inferior si los dos rasgos son diferentes.
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Etiqueta la parte superior. Los rasgos del otro progenitor deben dividirse de la misma forma, pero esta vez coloca una letra encima de la columna izquierda y la otra sobre la columna derecha. Así se representará la contribución del segundo progenitor al genotipo del hijo. [3] X Fuente de investigación
- Es habitual poner un rasgo dominante (letra mayúscula) a la izquierda y un rasgo recesivo (letra minúscula) a la derecha, si los dos rasgos son diferentes.
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Introduce la información conocida. Ahora puedes rellenar cada cuadrado y, dentro de cada uno, escribe la letra que se corresponde con la fila en la que se encuentra el cuadro. A continuación, escribe la letra que se corresponde con la columna en la que se encuentra el cuadro. Así se identificarán todos los posibles genotipos para los hijos así como el porcentaje en el que se darían. [4] X Fuente de investigación
- Para los rasgos mixtos, escribe el genotipo para que el rasgo dominante aparezca primero (Rr en lugar de rR).
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Selecciona un cebador. Un cebador es una molécula que se une a una secuencia particular de ADN. Una vez unida, puede detectarse el aglutinante para determinar si la secuencia estaba presente o no en la muestra. Esto permite probar secuencias específicas que correspondan a un genotipo particular. [5] X Fuente de investigación
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Recoge una muestra de ADN. Cuando hayas seleccionado un cebador que se una a la secuencia en cuestión, necesitarás extraer ADN de la célula. Sigue el protocolo de extracción adecuado de tu laboratorio. Cuando hayas recogido una muestra, puedes examinarla. [6] X Fuente de investigación
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Añade el cebador a la muestra. Agrega el cebador a la muestra de ADN. Si la secuencia que corresponde a este cebador está presente, se unirá a la molécula y, cuando el proceso se haya completado, podrás pasar al análisis. [7] X Fuente de investigación
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Analiza los resultados. En los casos simples, los resultados resurgen meramente como positivos o negativos en función de si el cebador estaba unido o no a las cadenas de ADN. Algunos métodos más complejos pueden exigir procedimientos de post-PCR. Se trata de técnicas que pueden ser largas y costosas, por lo que se deben evitar en la medida de lo posible. [8] X Fuente de investigaciónAnuncio
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Digiere una muestra de ADN. La digestión de ADN es un proceso que fragmenta las dos cadenas del ácido desoxirribonucleico. De esta forma, cada cadena se queda sin su par de bases complementarias y esta abertura le permite al ADN unirse a otras cadenas de ese tipo. [9] X Fuente de investigación
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Separa fragmentos mediante electroforesis. La electroforesis es un proceso que emplea la corriente eléctrica para desplazar moléculas a través de un gel. En este caso, debes emplear gel de agarosa. El ADN llegará al extremo positivo del gel y se separará según el tamaño. [10] X Fuente de investigación
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Traspasa a papel de nailon o de nitrocelulosa. Cuando las cadenas se hayan separado, se deben traspasar fuera del gel. Emplea un procedimiento de traspaso Southern para transferir la muestra a una hoja de papel de nailon o de nitrocelulosa. Se trata de medios más apropiados para añadir la sonda. [11] X Fuente de investigación
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Añade una sonda. Las sondas son cadenas de ADN que complementan a las cadenas en cuestión. Si está presente el fragmento que representa un genotipo específico, se vinculará a la sonda. Esta también contiene una molécula fluorescente que se detectará durante el análisis. [12] X Fuente de investigación
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Lava el papel. Después de dejar suficiente tiempo para que la sonda se una a cualquier muestra presente, tendrás que lavar el papel. Sigue los procedimientos específicos de tu laboratorio, aunque generalmente solo es necesario enjuagar el papel ligeramente con agua. Ten cuidado y no contamines o estropees la muestra durante el lavado. [13] X Fuente de investigación
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Expón el papel. Cuando la muestra haya sido lavada, podrás examinarla. Al exponer la muestra a luz ultravioleta, el fluoróforo unido a la sonda se excitará, lo que producirá una imagen con áreas de intensa luz en relación con el fondo. Si no hay ninguna sonda presente, no aparecerán zonas iluminadas. [14] X Fuente de investigación
- La presencia de la sonda indica que la secuencia correspondiente al genotipo en cuestión está presente.
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Consejos
- El Proyecto Genoma Humano ha desarrollado métodos para secuenciar directamente el ADN, que permiten la determinación de genotipos a gran escala.
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Referencias
- ↑ https://www.hobart.k12.in.us/jkousen/Biology/psquare.htm
- ↑ https://www.hobart.k12.in.us/jkousen/Biology/psquare.htm
- ↑ https://www.hobart.k12.in.us/jkousen/Biology/psquare.htm
- ↑ https://www.hobart.k12.in.us/jkousen/Biology/psquare.htm
- ↑ http://www.the-scientist.com/?articles.view/articleNo/25120/title/Genotyping-with-PCR/
- ↑ http://www.the-scientist.com/?articles.view/articleNo/25120/title/Genotyping-with-PCR/
- ↑ http://www.the-scientist.com/?articles.view/articleNo/25120/title/Genotyping-with-PCR/
- ↑ http://www.the-scientist.com/?articles.view/articleNo/25120/title/Genotyping-with-PCR/
- ↑ https://www.ndsu.edu/pubweb/~mcclean/plsc731/dna/dna6.htm
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