Cómo medir el crecimiento bacteriano

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Coescrito por Bess Ruff, MA

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Existen muchos métodos para medir el crecimiento de las bacterias y algunos son más complejos que otros. Los métodos más sencillos son bastante exactos y de uso común (aunque sacrifican cierta consistencia en las medidas). Entre los más conocidos se encuentran los siguientes: observar y contar las bacterias de manera directa, medir la masa húmeda o seca y medir el nivel de turbidez. El laboratorio de tu centro de estudios debe contar con el equipo y los suministros adecuados para llevar a cabo al menos uno de estos experimentos. [1]

Método 1
Método 1 de 3:

Observar las bacterias de manera directa

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    Existen algunas herramientas especiales con las que debes contar además de las que se encuentran en la mayoría de los laboratorios de biología. Si preparas todos los instrumentos y recipientes con anticipación, lograrás completar el experimento sin tener que entrar y salir del gabinete a cada momento. Es importante que conozcas de antemano cada pieza que vas a utilizar. Además, debes conocer algunos términos básicos.
    • Consigue una cámara de recuento. Esta herramienta cuenta con una cámara, un portaobjetos y un microscopio incorporado, por lo que es fácil de configurar y utilizar. Puedes adquirirla en laboratorios y empresas de suministros para el aula. La cámara viene con instrucciones para guiarte a lo largo de todo el proceso.
    • Consigue una placa de Petri. Este es el recipiente en el que vas a observar las bacterias.
    • Cultivo es el término utilizado para describir un organismo que se ha desarrollado de manera artificial para un experimento.
    • Caldo es un medio líquido en el que se desarrolla el cultivo.
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    Puedes colocar las bacterias directamente sobre esta placa para observarlas bajo el microscopio. Aplica el cultivo sobre la placa y colócalo bajo el microscopio para observar cuántas células bacterianas contiene.
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    Si existen demasiadas bacterias, estas se superpondrán y no conseguirás un recuento preciso. Debes diluir el cultivo mezclándolo con más caldo. Si observas muy pocas bacterias, no tendrás las suficientes para dar con un número exacto. Debes filtrar el caldo utilizando un sistema de filtración.
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    El último paso es contarlas físicamente. Debes observar a través de la lupa de la cámara y anotar la cantidad de bacterias que detectes. Compara este resultado con los de otras pruebas.
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Método 2
Método 2 de 3:

Medir la masa húmeda y seca

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    Este método consume demasiado tiempo y supone el uso de equipo muy costoso. A menos que tu laboratorio cuente con el equipo adecuado, debes considerar el uso de un método diferente. Sin embargo, la medición de la masa húmeda y seca arroja lecturas más consistentes. Vas a necesitar las siguientes herramientas: [2]
    • un horno hidráulico de convección por gravedad
    • una bandeja de pesaje de aluminio
    • un juego de matraces
    • una centrifugadora o un sistema de filtración para laboratorio
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    En esta etapa, el cultivo debe encontrarse en el caldo, aunque lo vas a separar nuevamente más adelante.
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    También puedes utilizar un filtro de membrana de acetato de celulosa de 47 mm de diámetro y con poros de 0,45 μm. [3] Debes pesar la bandeja para saber cuánto vas a restarle a tu medida una vez que coloques las células bacterianas encima.
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    Las células se hundirán de manera natural debido a la gravedad. Debes revolverlas un poco para asegurarte de que se extiendan de manera uniforme dentro del matraz. De esta manera, obtendrás una muestra más representativa.
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    Esta herramienta hace girar el matraz rápidamente con un contrapeso para drenar el caldo y dejar el cultivo. En esta guía encontrarás una descripción más detallada de este procedimiento.
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    Puedes desechar el caldo, ya que no lo vas a necesitar más. Sin embargo, debes conservar el matraz porque aún lo vas a utilizar.
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    Debes agregar el agua de enjuague del matraz a las células bacterianas. De esta manera, obtendrás el peso húmedo.
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    Para obtener esta medida, debes colocar la bandeja en el horno y secarlo a 100 ºC entre 6 y 24 horas (siguiendo las instrucciones específicas del horno y la bandeja de pesaje). Para evitar que las bacterias se quemen, debes asegurarte de no configurar el horno por encima de esta temperatura. En cuanto pase el tiempo indicado, debes pesar las bacterias. Recuerda que tienes que restar el peso de la bandeja de pesaje. [4]
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Método 3
Método 3 de 3:

Medir el nivel de turbidez

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    Necesitas una fuente de luz y un espectrofotómetro. Estos se encuentran disponibles en las tiendas de suministros para laboratorios de ciencias. El espectrofotómetro cuenta con instrucciones para el uso correcto del modelo específico que vas a adquirir. Este equipo es económico y fácil de utilizar y es la razón por la que este método es uno de los más comunes para medir el crecimiento bacteriano. [5]
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    En términos sencillos, el nivel de turbidez indica cuán revuelta luce la muestra. Deberías obtener una lectura en unidades nefelométricas de turbidez (NTU, por sus siglas en inglés). El equipo puede requerir una cierta calibración antes de que puedas medir con exactitud el nivel de turbidez de la muestra.
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    La turbidez corresponde a la cantidad de bacterias que contiene la muestra. El espectrofotómetro también te indica el porcentaje de transmisión. Este número será mayor si la turbidez es menor. Debes comparar los resultados de diferentes pruebas para medir el crecimiento bacteriano.
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Advertencias

  • Debido a que vas a tratar con colonias bacterianas, debes tomar todas las precauciones necesarias (por ejemplo, el uso de gafas de seguridad y guantes para protegerte). Además, puedes utilizar una mascarilla contra el polvo, en especial si no estás seguro del tipo de bacterias que vas a cultivar.
  • Debes tomar precauciones con cualquier tipo de bacterias, incluso si consideras que son inofensivas. Asegúrate de cubrir por completo las heridas abiertas, los cortes y los rasguños antes de empezar.
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Cosas que necesitarás

  • caldo bacteriano o agua (del grifo, de una piscina o de un estanque)
  • un medio estéril (como el agar)
  • placas de Petri
  • pipetas estériles
  • un microscopio (opcional)
  • una cámara de recuento
  • guantes de látex
  • gafas de seguridad
  • un horno hidráulico

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Referencias

  1. ↑ http://www.textbookofbacteriology.net/growth.html
  2. ↑ http://www.eng.umd.edu/~nsw/ench485/lab9c.htm
  3. ↑ http://www.eng.umd.edu/~nsw/ench485/lab9c.htm
  4. ↑ http://www.eng.umd.edu/~nsw/ench485/lab9c.htm
  5. ↑ http://www.eng.umd.edu/~nsw/ench485/lab9c.htm

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